胎牛血清（熱滅活，WinSera ®）

產(chǎn)品名稱：熱滅活胎牛血清

英文名稱：Heat-inactivated fetal bovine serum

規(guī)格：500ml

品牌：WinSera ®（千舍出品）

品牌：WINSERA®國(guó)內(nèi)科研實(shí)驗(yàn)室使用比較普遍，價(jià)格相對(duì)實(shí)惠，能滿足很多常規(guī)細(xì)胞的培養(yǎng)需求。

相對(duì)而言，國(guó)產(chǎn)品牌血清由于采血的不可控性和生產(chǎn)工藝的差別，質(zhì)量參差不齊，最讓人擔(dān)心的還是批間差異大，質(zhì)量不穩(wěn)定。

它來(lái)了 它來(lái)了  2022它風(fēng)風(fēng)火火的走來(lái)了~~

童鞋甲：常規(guī)滅活建議的溫度在45℃到62℃之間，而時(shí)間則從15分鐘到60分鐘不等，其中常用的手法是56℃熱處理30分鐘?？纯茨沭B(yǎng)的細(xì)胞是什么，一般的話估計(jì)問(wèn)題不大，要是很珍貴的細(xì)胞還是慎重一點(diǎn)啊。

童鞋乙：熱滅活目的是為了去除血清中補(bǔ)體等對(duì)熱敏感的物質(zhì)， 在對(duì)補(bǔ)體滅活以外，熱處理同時(shí)也對(duì)血清中可能存在的支原體具有滅活作用。現(xiàn)在好像不主張熱滅活，熱滅活經(jīng)常給血清產(chǎn)品帶來(lái)負(fù)面影響，對(duì)血清的加熱經(jīng)常導(dǎo)致血清中沉淀的產(chǎn)生，此外，有研究結(jié)果證實(shí)熱滅活步驟減弱了胎牛血清和小牛血清對(duì)細(xì)胞的促粘附作用。

專家A：實(shí)驗(yàn)顯示，即使對(duì)血清進(jìn)行正確的熱滅活處理,對(duì)大多數(shù)的細(xì)胞而言也是不需要的。經(jīng)此處理過(guò)的血清對(duì)細(xì)胞的生長(zhǎng)只有微小的促進(jìn)，或*沒(méi)有任何作用，甚至通常因?yàn)楦邷靥幚碛绊懥搜宓馁|(zhì)量，而造成細(xì)胞生長(zhǎng)速率的降低。

而經(jīng)過(guò)熱處理的血清,沉淀物的形成會(huì)顯著的增多,這些沉淀物在倒置顯微鏡下觀察,像是"小黑點(diǎn)",常常會(huì)讓研究者誤以為是血清遭受污染,而把血清放在37℃環(huán)境中,又會(huì)使此沉淀物更增多,使研究者認(rèn)為是微生物的分裂擴(kuò)增。

因此若非必須,可以不需要做熱處理這一步.如此一來(lái),不但節(jié)省寶貴的時(shí)間,更確保血清的質(zhì)量。

專家B：血清從-20℃冰箱拿出來(lái)之后在常溫解凍，然后混勻分裝成兩份，一份滅活，一份不滅活，比較這兩種血清對(duì)細(xì)胞是否有影響。然后再確定是滅活還是不滅活。這個(gè)過(guò)程最多也就一個(gè)星期。同時(shí)你還要考慮血清滅活與否對(duì)你后續(xù)的實(shí)驗(yàn)有沒(méi)有影響。

一般來(lái)說(shuō)，像巨噬細(xì)胞或者能被補(bǔ)體激活的而影響實(shí)驗(yàn)過(guò)程或者結(jié)果的細(xì)胞，血清在使用前必須滅火，還有就是原代細(xì)胞，這類細(xì)胞必須使用滅活血清；但是像其他細(xì)胞株，沒(méi)必要的。因?yàn)闇缁疬^(guò)程中不僅會(huì)滅火補(bǔ)體，還能損傷血清中的其他物質(zhì)，不利于細(xì)胞生長(zhǎng)。

最后是老營(yíng)長(zhǎng)的總結(jié)

（科學(xué)面對(duì)血清熱滅活的爭(zhēng)議）

成為常規(guī)操作的血清熱滅活

至少70%的研究者對(duì)血清的滅活僅僅是因?yàn)樽裾粘Ｒ?guī)操作，或者說(shuō)認(rèn)為是理所當(dāng)然的。常規(guī)滅活建議的溫度在45℃到62℃之間，而時(shí)間則從15分鐘到60分鐘不等，其中常用的手法是56℃熱處理30分鐘。隨著血清采集、處理、加工工藝的提高，許多早先認(rèn)為是熱滅活的原因已經(jīng)不再成立，只有少數(shù)對(duì)血清進(jìn)行熱滅活的研究者在實(shí)驗(yàn)中證實(shí)了這一步驟的有效性和必要性。

熱敏補(bǔ)體與熱滅活

熱滅活目的是為了去除血清中補(bǔ)體等對(duì)熱敏感的物質(zhì)，但是在胎牛血清中對(duì)補(bǔ)體的滅活則明顯沒(méi)有必要。Triglia和Linscott曾對(duì)商業(yè)胎牛血清中的補(bǔ)體成分進(jìn)行測(cè)定，他們發(fā)現(xiàn)胎牛血清中含有的C1，C6僅達(dá)成年動(dòng)物血清的1-3%，而其它補(bǔ)體成分僅有成年動(dòng)物的5-50%，至于補(bǔ)體的主要成分C3在胎牛血清中則幾乎不能檢出。通過(guò)補(bǔ)體固定實(shí)驗(yàn)，我們也在多個(gè)不同批次的胎牛血清中獲得了相似的結(jié)果。即使是在未稀釋的血清中，也未發(fā)現(xiàn)有明顯的溶血現(xiàn)象。

另外，多數(shù)實(shí)驗(yàn)室在培養(yǎng)前將培養(yǎng)液進(jìn)行預(yù)熱的過(guò)程，也對(duì)熱敏的補(bǔ)體有滅活的作用。

支原體與熱滅活

在對(duì)補(bǔ)體滅活以外，熱處理同時(shí)也對(duì)血清中可能存在的支原體具有滅活作用。多年以前，450納米孔徑的濾膜被用于加工血清時(shí)，血清中支原體的污染時(shí)有發(fā)生。針對(duì)這個(gè)問(wèn)題，HyClone使用100納米三層濾膜連續(xù)濾過(guò)技術(shù)，自從采用這項(xiàng)技術(shù)以及后來(lái)的40納米濾過(guò)技術(shù)之后，我們的血清產(chǎn)品中沒(méi)有再發(fā)現(xiàn)有支原體的污染，也是使得熱滅活成為不必要的另外一個(gè)原因。

人誘導(dǎo)多能干細(xì)胞（iPSC）培養(yǎng)體系

iPS細(xì)胞培養(yǎng)添加劑（配套）

iPS細(xì)胞消化液（相關(guān)1）

matrix基質(zhì)膠（相關(guān)2）

iPS細(xì)胞專用因子Y27632（相關(guān)3）

H9人類胚胎干細(xì)胞培養(yǎng)體系

H9細(xì)胞培養(yǎng)添加劑（配套）

H9細(xì)胞消化液（相關(guān)1）

matrix基質(zhì)膠（相關(guān)2）

H9細(xì)胞專用因子Y27632（相關(guān)3）

H1人類胚胎干細(xì)胞培養(yǎng)體系

H1細(xì)胞培養(yǎng)添加劑（配套）

H1細(xì)胞消化液（相關(guān)1）

matrix基質(zhì)膠（相關(guān)2）

H1細(xì)胞專用因子Y27632（相關(guān)3）

干細(xì)胞成骨誘導(dǎo)分化試劑盒（培養(yǎng)體系）

干細(xì)胞成軟骨誘導(dǎo)分化試劑盒（培養(yǎng)體系）

干細(xì)胞成脂誘導(dǎo)分化試劑盒（培養(yǎng)體系）

原代上皮細(xì)胞培養(yǎng)體系

原代內(nèi)皮細(xì)胞培養(yǎng)體系

原代成纖維細(xì)胞培養(yǎng)體系

原代成纖維細(xì)胞無(wú)血清培養(yǎng)基

原代平滑肌細(xì)胞低血清培養(yǎng)體系

原代平滑肌細(xì)胞培養(yǎng)體系

原代神經(jīng)元細(xì)胞培養(yǎng)體系

原代少突膠質(zhì)細(xì)胞培養(yǎng)體系

原代星形膠質(zhì)細(xì)胞培養(yǎng)體系

原代肝實(shí)質(zhì)細(xì)胞培養(yǎng)體系

原代星狀細(xì)胞培養(yǎng)體系

原代角質(zhì)形成細(xì)胞培養(yǎng)體系

原代巨噬細(xì)胞培養(yǎng)體系

原代間充干細(xì)胞無(wú)血清培養(yǎng)體系

原代間充干細(xì)胞培養(yǎng)體系

原代內(nèi)皮祖細(xì)胞培養(yǎng)體系

原代神經(jīng)干細(xì)胞培養(yǎng)體系

原代周細(xì)胞培養(yǎng)體系

原代雪旺細(xì)胞培養(yǎng)體系

原代黑色素細(xì)胞培養(yǎng)體系

原代骨骼肌細(xì)胞培養(yǎng)體系

原代成骨細(xì)胞培養(yǎng)體系

原代軟骨細(xì)胞培養(yǎng)體系

原代腎系膜細(xì)胞培養(yǎng)體系

原代心肌細(xì)胞培養(yǎng)體系

原代前脂肪細(xì)胞培養(yǎng)體系

原代腫瘤細(xì)胞培養(yǎng)體系

原代間質(zhì)細(xì)胞培養(yǎng)體系

原代T淋巴細(xì)胞培養(yǎng)體系

原代基質(zhì)細(xì)胞培養(yǎng)體系

原代卵巢顆粒細(xì)胞培養(yǎng)體系

原代肥大細(xì)胞培養(yǎng)體系

原代樹(shù)突狀（DC)細(xì)胞培養(yǎng)體系

原代破骨細(xì)胞培養(yǎng)體系

原代NK細(xì)胞培養(yǎng)體系

原代精原細(xì)胞培養(yǎng)體系

原代內(nèi)膜細(xì)胞培養(yǎng)體系

原代B淋巴細(xì)胞培養(yǎng)體系

原代CIK細(xì)胞培養(yǎng)體系

胚胎發(fā)育與熱滅活

胎牛血清（熱滅活，WinSera ®）

Pinyopummintr等證明血清去除滅活步驟不影響牛胚胎的發(fā)育分化；有研究結(jié)果證實(shí)熱滅活步驟減弱了胎牛血清和小牛血清對(duì)細(xì)胞的促粘附作用，在用SV-BHK、BALB-3T3、CV－1、FS-4細(xì)胞對(duì)細(xì)胞粘附實(shí)驗(yàn)中，熱滅活對(duì)胎牛血清的影響小于對(duì)小牛血清的影響。

細(xì)胞株生長(zhǎng)與熱滅活

我們調(diào)查了熱滅活對(duì)胎牛血清以及對(duì)其中不同細(xì)胞株生長(zhǎng)能力的影響。通過(guò)比較11個(gè)不同細(xì)胞株，發(fā)現(xiàn)其中熱滅活對(duì)6個(gè)細(xì)胞株（HBAE，MDBK，Vero，成纖維細(xì)胞，MRC-5）的生長(zhǎng)帶來(lái)負(fù)面影響，三個(gè)細(xì)胞株（FOX-NY，MDCK和CHO-K1）不受熱滅活的影響，而只有兩個(gè)細(xì)胞株（Balb/3T3，Sp2/0Ag14 hybrid），在熱滅活之后，細(xì)胞生長(zhǎng)有輕微的改善。所以，在正常的操作下，熱滅活通常對(duì)細(xì)胞的生長(zhǎng)沒(méi)有明顯的促進(jìn)作用。

沉淀與熱滅活

在正常操作下，熱滅活經(jīng)常給血清產(chǎn)品帶來(lái)負(fù)面的影響，對(duì)血清的加熱經(jīng)常導(dǎo)致血清中沉淀的產(chǎn)生，而導(dǎo)致的沉淀又常常被認(rèn)為是微生物的污染。注意到這個(gè)現(xiàn)象之后，為了驗(yàn)證污染的存在，或者促進(jìn)沉淀的溶解，許多培養(yǎng)者往往將血清放置37℃溫育。這卻往往使情況變得更糟，血清中的蛋白進(jìn)一步的析出，為了確信血清未被污染，進(jìn)行的鏡檢，無(wú)菌培養(yǎng)試驗(yàn)，和革蘭氏染色試驗(yàn)更是浪費(fèi)了實(shí)驗(yàn)者大量的時(shí)間和精力。

結(jié)論

總之，多數(shù)細(xì)胞培養(yǎng)中血清的熱滅活并不是必要的。很多場(chǎng)合下，熱滅活并不會(huì)改善細(xì)胞的生長(zhǎng)，卻降低了支持細(xì)胞生長(zhǎng)的能力。即使在少數(shù)有促進(jìn)的情況下，其促進(jìn)的比率也是微不足道的。另外，血清的熱滅活導(dǎo)致的沉淀常常被認(rèn)為是微生物的污染，從而給用戶和供應(yīng)商都帶來(lái)不必要的麻煩。我們建議，對(duì)于那些對(duì)血清進(jìn)行滅活的用戶，需要通過(guò)試驗(yàn)來(lái)證實(shí)其必要性，確定滅活的適當(dāng)條件；在滅活過(guò)程中，需要嚴(yán)格認(rèn)真監(jiān)測(cè)，并選擇一個(gè)可重復(fù)的方案進(jìn)行操作。