熱滅活胎牛血清（WinSera）

產(chǎn)品名稱：熱滅活胎牛血清

英文名稱：Heat-inactivated fetal bovine serum

規(guī)格：500ml

品牌：WinSera ®（千舍出品）

品牌：WINSERA®國內(nèi)科研實驗室使用比較普遍，價格相對實惠，能滿足很多常規(guī)細(xì)胞的培養(yǎng)需求。

相對而言，國產(chǎn)品牌血清由于采血的不可控性和生產(chǎn)工藝的差別，質(zhì)量參差不齊，最讓人擔(dān)心的還是批間差異大，質(zhì)量不穩(wěn)定。

它來了 它來了  2022它風(fēng)風(fēng)火火的走來了~~

童鞋甲：常規(guī)滅活建議的溫度在45℃到62℃之間，而時間則從15分鐘到60分鐘不等，其中常用的手法是56℃熱處理30分鐘。看看你養(yǎng)的細(xì)胞是什么，一般的話估計問題不大，要是很珍貴的細(xì)胞還是慎重一點啊。

童鞋乙：熱滅活目的是為了去除血清中補體等對熱敏感的物質(zhì)， 在對補體滅活以外，熱處理同時也對血清中可能存在的支原體具有滅活作用?，F(xiàn)在好像不主張熱滅活，熱滅活經(jīng)常給血清產(chǎn)品帶來負(fù)面影響，對血清的加熱經(jīng)常導(dǎo)致血清中沉淀的產(chǎn)生，此外，有研究結(jié)果證實熱滅活步驟減弱了胎牛血清和小牛血清對細(xì)胞的促粘附作用。

專家A：實驗顯示，即使對血清進行正確的熱滅活處理,對大多數(shù)的細(xì)胞而言也是不需要的。經(jīng)此處理過的血清對細(xì)胞的生長只有微小的促進，或*沒有任何作用，甚至通常因為高溫處理影響了血清的質(zhì)量，而造成細(xì)胞生長速率的降低。

而經(jīng)過熱處理的血清,沉淀物的形成會顯著的增多,這些沉淀物在倒置顯微鏡下觀察,像是"小黑點",常常會讓研究者誤以為是血清遭受污染,而把血清放在37℃環(huán)境中,又會使此沉淀物更增多,使研究者認(rèn)為是微生物的分裂擴增。

因此若非必須,可以不需要做熱處理這一步.如此一來,不但節(jié)省寶貴的時間,更確保血清的質(zhì)量。

專家B：血清從-20℃冰箱拿出來之后在常溫解凍，然后混勻分裝成兩份，一份滅活，一份不滅活，比較這兩種血清對細(xì)胞是否有影響。然后再確定是滅活還是不滅活。這個過程最多也就一個星期。同時你還要考慮血清滅活與否對你后續(xù)的實驗有沒有影響。

一般來說，像巨噬細(xì)胞或者能被補體激活的而影響實驗過程或者結(jié)果的細(xì)胞，血清在使用前必須滅火，還有就是原代細(xì)胞，這類細(xì)胞必須使用滅活血清；但是像其他細(xì)胞株，沒必要的。因為滅火過程中不僅會滅火補體，還能損傷血清中的其他物質(zhì)，不利于細(xì)胞生長。

最后是老營長的總結(jié)

（科學(xué)面對血清熱滅活的爭議）

成為常規(guī)操作的血清熱滅活

至少70%的研究者對血清的滅活僅僅是因為遵照常規(guī)操作，或者說認(rèn)為是理所當(dāng)然的。常規(guī)滅活建議的溫度在45℃到62℃之間，而時間則從15分鐘到60分鐘不等，其中常用的手法是56℃熱處理30分鐘。隨著血清采集、處理、加工工藝的提高，許多早先認(rèn)為是熱滅活的原因已經(jīng)不再成立，只有少數(shù)對血清進行熱滅活的研究者在實驗中證實了這一步驟的有效性和必要性。

熱敏補體與熱滅活

熱滅活目的是為了去除血清中補體等對熱敏感的物質(zhì)，但是在胎牛血清中對補體的滅活則明顯沒有必要。Triglia和Linscott曾對商業(yè)胎牛血清中的補體成分進行測定，他們發(fā)現(xiàn)胎牛血清中含有的C1，C6僅達(dá)成年動物血清的1-3%，而其它補體成分僅有成年動物的5-50%，至于補體的主要成分C3在胎牛血清中則幾乎不能檢出。通過補體固定實驗，我們也在多個不同批次的胎牛血清中獲得了相似的結(jié)果。即使是在未稀釋的血清中，也未發(fā)現(xiàn)有明顯的溶血現(xiàn)象。

另外，多數(shù)實驗室在培養(yǎng)前將培養(yǎng)液進行預(yù)熱的過程，也對熱敏的補體有滅活的作用。

支原體與熱滅活

在對補體滅活以外，熱處理同時也對血清中可能存在的支原體具有滅活作用。多年以前，450納米孔徑的濾膜被用于加工血清時，血清中支原體的污染時有發(fā)生。針對這個問題，HyClone使用100納米三層濾膜連續(xù)濾過技術(shù)，自從采用這項技術(shù)以及后來的40納米濾過技術(shù)之后，我們的血清產(chǎn)品中沒有再發(fā)現(xiàn)有支原體的污染，也是使得熱滅活成為不必要的另外一個原因。

人誘導(dǎo)多能干細(xì)胞（iPSC）培養(yǎng)體系

iPS細(xì)胞培養(yǎng)添加劑（配套）

iPS細(xì)胞消化液（相關(guān)1）

matrix基質(zhì)膠（相關(guān)2）

iPS細(xì)胞專用因子Y27632（相關(guān)3）

H9人類胚胎干細(xì)胞培養(yǎng)體系

H9細(xì)胞培養(yǎng)添加劑（配套）

H9細(xì)胞消化液（相關(guān)1）

matrix基質(zhì)膠（相關(guān)2）

H9細(xì)胞專用因子Y27632（相關(guān)3）

H1人類胚胎干細(xì)胞培養(yǎng)體系

H1細(xì)胞培養(yǎng)添加劑（配套）

H1細(xì)胞消化液（相關(guān)1）

matrix基質(zhì)膠（相關(guān)2）

H1細(xì)胞專用因子Y27632（相關(guān)3）

干細(xì)胞成骨誘導(dǎo)分化試劑盒（培養(yǎng)體系）

干細(xì)胞成軟骨誘導(dǎo)分化試劑盒（培養(yǎng)體系）

干細(xì)胞成脂誘導(dǎo)分化試劑盒（培養(yǎng)體系）

原代上皮細(xì)胞培養(yǎng)體系

原代內(nèi)皮細(xì)胞培養(yǎng)體系

原代成纖維細(xì)胞培養(yǎng)體系

原代成纖維細(xì)胞無血清培養(yǎng)基

原代平滑肌細(xì)胞低血清培養(yǎng)體系

原代平滑肌細(xì)胞培養(yǎng)體系

原代神經(jīng)元細(xì)胞培養(yǎng)體系

原代少突膠質(zhì)細(xì)胞培養(yǎng)體系

原代星形膠質(zhì)細(xì)胞培養(yǎng)體系

原代肝實質(zhì)細(xì)胞培養(yǎng)體系

原代星狀細(xì)胞培養(yǎng)體系

原代角質(zhì)形成細(xì)胞培養(yǎng)體系

原代巨噬細(xì)胞培養(yǎng)體系

原代間充干細(xì)胞無血清培養(yǎng)體系

原代間充干細(xì)胞培養(yǎng)體系

原代內(nèi)皮祖細(xì)胞培養(yǎng)體系

原代神經(jīng)干細(xì)胞培養(yǎng)體系

原代周細(xì)胞培養(yǎng)體系

原代雪旺細(xì)胞培養(yǎng)體系

原代黑色素細(xì)胞培養(yǎng)體系

原代骨骼肌細(xì)胞培養(yǎng)體系

原代成骨細(xì)胞培養(yǎng)體系

原代軟骨細(xì)胞培養(yǎng)體系

原代腎系膜細(xì)胞培養(yǎng)體系

原代心肌細(xì)胞培養(yǎng)體系

原代前脂肪細(xì)胞培養(yǎng)體系

原代腫瘤細(xì)胞培養(yǎng)體系

原代間質(zhì)細(xì)胞培養(yǎng)體系

原代T淋巴細(xì)胞培養(yǎng)體系

原代基質(zhì)細(xì)胞培養(yǎng)體系

原代卵巢顆粒細(xì)胞培養(yǎng)體系

原代肥大細(xì)胞培養(yǎng)體系

原代樹突狀（DC)細(xì)胞培養(yǎng)體系

原代破骨細(xì)胞培養(yǎng)體系

原代NK細(xì)胞培養(yǎng)體系

原代精原細(xì)胞培養(yǎng)體系

熱滅活胎牛血清（WinSera）

原代內(nèi)膜細(xì)胞培養(yǎng)體系

原代B淋巴細(xì)胞培養(yǎng)體系

原代CIK細(xì)胞培養(yǎng)體系

胚胎發(fā)育與熱滅活

Pinyopummintr等證明血清去除滅活步驟不影響牛胚胎的發(fā)育分化；有研究結(jié)果證實熱滅活步驟減弱了胎牛血清和小牛血清對細(xì)胞的促粘附作用，在用SV-BHK、BALB-3T3、CV－1、FS-4細(xì)胞對細(xì)胞粘附實驗中，熱滅活對胎牛血清的影響小于對小牛血清的影響。

細(xì)胞株生長與熱滅活

我們調(diào)查了熱滅活對胎牛血清以及對其中不同細(xì)胞株生長能力的影響。通過比較11個不同細(xì)胞株，發(fā)現(xiàn)其中熱滅活對6個細(xì)胞株（HBAE，MDBK，Vero，成纖維細(xì)胞，MRC-5）的生長帶來負(fù)面影響，三個細(xì)胞株（FOX-NY，MDCK和CHO-K1）不受熱滅活的影響，而只有兩個細(xì)胞株（Balb/3T3，Sp2/0Ag14 hybrid），在熱滅活之后，細(xì)胞生長有輕微的改善。所以，在正常的操作下，熱滅活通常對細(xì)胞的生長沒有明顯的促進作用。

沉淀與熱滅活

在正常操作下，熱滅活經(jīng)常給血清產(chǎn)品帶來負(fù)面的影響，對血清的加熱經(jīng)常導(dǎo)致血清中沉淀的產(chǎn)生，而導(dǎo)致的沉淀又常常被認(rèn)為是微生物的污染。注意到這個現(xiàn)象之后，為了驗證污染的存在，或者促進沉淀的溶解，許多培養(yǎng)者往往將血清放置37℃溫育。這卻往往使情況變得更糟，血清中的蛋白進一步的析出，為了確信血清未被污染，進行的鏡檢，無菌培養(yǎng)試驗，和革蘭氏染色試驗更是浪費了實驗者大量的時間和精力。

結(jié)論

總之，多數(shù)細(xì)胞培養(yǎng)中血清的熱滅活并不是必要的。很多場合下，熱滅活并不會改善細(xì)胞的生長，卻降低了支持細(xì)胞生長的能力。即使在少數(shù)有促進的情況下，其促進的比率也是微不足道的。另外，血清的熱滅活導(dǎo)致的沉淀常常被認(rèn)為是微生物的污染，從而給用戶和供應(yīng)商都帶來不必要的麻煩。我們建議，對于那些對血清進行滅活的用戶，需要通過試驗來證實其必要性，確定滅活的適當(dāng)條件；在滅活過程中，需要嚴(yán)格認(rèn)真監(jiān)測，并選擇一個可重復(fù)的方案進行操作。