人iPS細胞   （國家干細胞資源庫） 人誘導多功能干細胞 人誘導多功能細胞培養(yǎng)基 貼壁 克隆狀

細胞培養(yǎng):體外模擬體內需要的生長條件（溫度，營養(yǎng)等），然后加上一些處理條件，比如做藥物篩選，就可以做抗性基因的表達的篩選，比如還可以測定某個基因敲低或是過表達的產物，這個當然要結合WB來看最后基因的表達產物是否升高哦，細胞培養(yǎng)的應用還有很多~~

細胞培養(yǎng)的基本原理：細胞傳代（生存空間和營養(yǎng)不足，長得太密，代謝廢物太多，要洗洗，同時也要分離出一部分細胞，要加入新的培養(yǎng)液），換液（生存空間和營養(yǎng)剩余，但是代謝廢物太多，要洗洗，要吃飯，才能長好，所以要洗和加入新鮮培養(yǎng)基），凍存（太多了，先存起來，液氮里面里就是低溫，保存能量，活得久），復蘇（解凍，恢復吃飯的能力，恢復生長。）這四步。

細胞培養(yǎng)的基本步驟（一定要明白每個步驟的意義和目的）：

01細胞傳代（貼壁細胞）：試劑：PBS，含血清的培養(yǎng)基；流程：顯微鏡下看一看培養(yǎng)皿里的細胞多不多，太多（80%~90%）會導致代謝廢物很多，先吸掉廢液，再用PBS洗一洗，同時太多會導致細胞黏在一起，這時候就需要加點消除它們之間的粘性，是否消除完，在顯微鏡下看一看，看完加入適宜的含血清的培養(yǎng)基，中和一下胰，這叫吹打，除此之外，細胞太多了，把一部分細胞移出來，加入適量的培養(yǎng)基放入孵箱繼續(xù)培養(yǎng)，這叫傳代。02細胞換液：試劑：PBS，含血清的培養(yǎng)基；流程：先吸掉代謝廢物（即細胞瓶中的培養(yǎng)液），再用PBS洗一洗，由于細胞長得不是很多，細胞之間沒有黏在一起，因此不需要加入胰來消除它們之間的粘性。由于細胞要吃飯，加入新鮮的含血清的培養(yǎng)基，最后放到孵箱里面進行培養(yǎng)。

03細胞凍存：試劑：凍存液，PBS，胰，含血清的培養(yǎng)基；流程：要凍存，先配置凍存液，凍存液包含了：DMSO：防止在低溫（零度以下至-196℃）保存細胞時，細胞內液會形成冰晶，滲透壓會發(fā)生改變，細胞結構會出現(xiàn)紊亂，會導致細胞出現(xiàn)損傷。凍存液制備時，一般需與血清一起配置：因為兩者互融時，會散發(fā)熱量，所以凍存液需提前制備。因為細胞太多了，需要凍存，所以要先看一看，吸一吸，洗一洗，分一分，中和一下，吹打制成細胞懸液，離心，吸掉上清液，加入凍存液，輕輕吹吸均勻，每管等量1ml裝入凍存管，4℃20min,-20℃30min,-80℃過夜，最后放入液氮罐。04細胞復蘇：試劑：含血清的培養(yǎng)基；流程：從液氮中取出凍存管，迅速（小于3min）置于37℃水浴鍋中，解凍時，邊晃動邊觀察，當看到只有一小塊冰存在時，即可從水浴鍋中取出，打開凍存管，迅速將細胞懸液吸到離心管中，輕輕混勻，1000r/min,離心五分鐘，吸掉上清液，沉淀中加入適量培養(yǎng)液，放入孵箱中，培養(yǎng)。還有就是：復蘇的細胞，需要在24小時后，換一次培養(yǎng)液。最后：在這里特別感謝B站上無私分享的細胞培養(yǎng)的視頻資源，正是你們的分享，幫助了我，我也會繼續(xù)把我學到的繼續(xù)分享，幫助更多的人！如果大家想要獲得這份視頻資源的話，可以在后臺私聊小編獲取哦，里面關于細胞培養(yǎng)的知識講解的超級詳細！明天我會繼續(xù)介紹細胞培養(yǎng)的一些注意事項以及WB的操作的步驟和原理。最后，如果覺得我的推文對你有用的話，請點個關注哦！

細胞培養(yǎng):體外模擬體內需要的生長條件（溫度，營養(yǎng)等），然后加上一些處理條件，比如做藥物篩選，就可以做抗性基因的表達的篩選，比如還可以測定某個基因敲低或是過表達的產物，這個當然要結合WB來看最后基因的表達產物是否升高哦，細胞培養(yǎng)的應用還有很多，歡迎大家在后臺留言。

細胞培養(yǎng)的基本原理：細胞傳代（生存空間和營養(yǎng)不足，長得太密，代謝廢物太多，要洗洗，同時也要分離出一部分細胞，要加入新的培養(yǎng)液），換液（生存空間和營養(yǎng)剩余，但是代謝廢物太多，要洗洗，要吃飯，才能長好，所以要洗和加入新鮮培養(yǎng)基），凍存（太多了，先存起來，液氮里面里就是低溫，保存能量，活得久），復蘇（解凍，恢復吃飯的能力，恢復生長。）這四步。

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細胞培養(yǎng)的基本步驟（一定要明白每個步驟的意義和目的）：

01細胞傳代（貼壁細胞）：試劑：PBS，含血清的培養(yǎng)基；流程：顯微鏡下看一看培養(yǎng)皿里的細胞多不多，太多（80%~90%）會導致代謝廢物很多，先吸掉廢液，再用PBS洗一洗，同時太多會導致細胞黏在一起，這時候就需要加點胰消除它們之間的粘性，是否消除完，在顯微鏡下看一看，看完加入適宜的含血清的培養(yǎng)基，中和一下胰，這叫吹打，除此之外，細胞太多了，把一部分細胞移出來，加入適量的培養(yǎng)基放入孵箱繼續(xù)培養(yǎng)，這叫傳代。02細胞換液：試劑：PBS，含血清的培養(yǎng)基；流程：先吸掉代謝廢物（即細胞瓶中的培養(yǎng)液），再用PBS洗一洗，由于細胞長得不是很多，細胞之間沒有黏在一起，因此不需要加入胰來消除它們之間的粘性。由于細胞要吃飯，加入新鮮的含血清的培養(yǎng)基，最后放到孵箱里面進行培養(yǎng)。

03細胞凍存：試劑：凍存液，PBS，胰，含血清的培養(yǎng)基；流程：要凍存，先配置凍存液，凍存液包含了：DMSO：防止在低溫（零度以下至-196℃）保存細胞時，細胞內液會形成冰晶，滲透壓會發(fā)生改變，細胞結構會出現(xiàn)紊亂，會導致細胞出現(xiàn)損傷。凍存液制備時，一般需與血清一起配置：因為兩者互融時，會散發(fā)熱量，所以凍存液需提前制備。因為細胞太多了，需要凍存，所以要先看一看，吸一吸，洗一洗，分一分，中和一下，吹打制成細胞懸液，離心，吸掉上清液，加入凍存液，輕輕吹吸均勻，每管等量1ml裝入凍存管，4℃20min,-20℃30min,-80℃過夜，最后放入液氮罐。04細胞復蘇：試劑：含血清的培養(yǎng)基；流程：從液氮中取出凍存管，迅速（小于3min）置于37℃水浴鍋中，解凍時，邊晃動邊觀察，當看到只有一小塊冰存在時，即可從水浴鍋中取出，打開凍存管，迅速將細胞懸液吸到離心管中，輕輕混勻，1000r/min,離心五分鐘，吸掉上清液，沉淀中加入適量培養(yǎng)液，放入孵箱中，培養(yǎng)。還有就是：復蘇的細胞，需要在24小時后，換一次培養(yǎng)液。最后：在這里特別感謝B站上無私分享的細胞培養(yǎng)的視頻資源，正是你們的分享，幫助了我，我也會繼續(xù)把我學到的繼續(xù)分享，幫助更多的人！如果大家想要獲得這份視頻資源的話，可以在后臺私聊小編獲取哦，里面關于細胞培養(yǎng)的知識講解的超級詳細！明天我會繼續(xù)介紹細胞培養(yǎng)的一些注意事項以及WB的操作的步驟和原理。