蘇州千舍生物-細(xì)胞培養(yǎng)知識(shí)之胰酶和雙抗

胰酶和雙抗作為細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中試劑的一部分，對(duì)細(xì)胞培養(yǎng)成功與否存在著關(guān)鍵的作用。但是對(duì)于胰酶和雙抗的基礎(chǔ)知識(shí)還是要多多了解的，不然就有可能禍禍你的細(xì)胞哦！

一、胰酶

胰酶是一種解離試劑，本質(zhì)是可以降解蛋白的酶，生物學(xué)實(shí)驗(yàn)中常用來(lái)把貼壁細(xì)胞從貼壁面解離下來(lái)和使細(xì)胞解聚，也可以用于原代細(xì)胞的傳代過(guò)程中分散組織。

胰酶使用的濃度是多少？常見濃度為0.25%的胰酶（含有螯合劑），半貼壁細(xì)胞或者對(duì)胰酶敏感的細(xì)胞，可采用0.05%濃度的胰酶（含有或者不含有螯合劑）進(jìn)行細(xì)胞消化。

為什么收到的胰酶會(huì)有顏色差異？

商品化胰酶溶液需要用干冰運(yùn)輸，在運(yùn)輸過(guò)程中，胰酶溶液中的二氧化碳與干冰揮發(fā)的二氧化碳可能會(huì)極少部分的氣體交換，導(dǎo)致溶液PH的漂移。有些胰酶溶液里含有酚紅作為PH值指示劑，因此胰酶PH的變化是肉眼可觀察到的。由干冰運(yùn)輸過(guò)程中導(dǎo)致的PH值的變化很小，PH值會(huì)從7.2-8.0變化到了6.8左右，在PH值7.2-8.0的時(shí)候，溶液呈淡紅色；PH值6.8左右時(shí)呈淡黃色的。因此胰酶顏色的變化是由PH值的變化引起，歸因于使用干冰運(yùn)輸。這種顏色的變化是行業(yè)普遍現(xiàn)象，在不同供應(yīng)商的胰酶產(chǎn)品都會(huì)出現(xiàn)。

淡黃色的胰酶溶液能放心使用嗎？簡(jiǎn)單一個(gè)字：能

對(duì)于胰酶呈黃色的問(wèn)題，不同品牌也都對(duì)此現(xiàn)象進(jìn)行了測(cè)試實(shí)驗(yàn)。變色的胰酶同樣能很好的用于細(xì)胞的解離，請(qǐng)放心使用。

細(xì)胞消化時(shí)，胰酶不去除對(duì)細(xì)胞的影響，如果消化液中只有胰酶，不含EDTA，不去除是沒有問(wèn)題的。

如果消化液中含有胰酶和EDTA，zui好去除。EDTA是一種化學(xué)螯合劑，主要作用在于能螯合Ca、Mg離子，使細(xì)胞分離。但EDTA不能被血清中和，消化后要*清洗去除，否則細(xì)胞易脫壁。胰酶胰酶和EDTA聯(lián)合使用可提高消化效率，所以常二者合用。

胰酶的保存：胰酶可在-20℃下保存一年。隨著時(shí)間延長(zhǎng)，胰酶的消化能力減弱。由于胰酶自身也是一種蛋白，胰酶也會(huì)自己剪切自己，建議胰酶不要反復(fù)凍融，拿到手中的大瓶胰酶進(jìn)行分裝使用。胰酶可分裝凍存，在使用前從-20℃冰箱取出。盡量避免在4℃長(zhǎng)期保存。

Hyclone胎牛血清SH30084.03  、Hyclone胎牛血清SH30406.02  、Hyclone胎牛血清SH30406.05 、Hyclone胎牛血清SH30396.03  、Hyclone胎牛血清SH30070.03

特級(jí)胎牛血清 SH30070.03E 、Hyclone胎牛血清 SH30370.03  、活性炭/葡聚糖胎牛血清 SH30068.03  、活性炭/葡聚糖處理胎牛血清，熱滅活 SH30068.03HI 、馬血清SH30074.03  、烏拉圭胎牛血清 SV30087. 03 、Hyclone胎牛血清SH30071.03 、Hyclone胎牛血清SV30160.03。

BOVOGEN胎牛血清 SFBS 、BOVOGEN新生牛血清 SNCS。

PAA 普通胎牛血清FBS A15-101 、PAA 優(yōu)等胎牛血清FBS A15-151。

BI優(yōu)等胎牛血清 04-001-1ACS 、BI ES級(jí)別胎牛血清 04-002-1A 、

BI 間充質(zhì)胎牛血清 04-400-1A 。

Corning胎牛血清 35-076-CV。

PAN胎牛血清FBS P30-3302  、PAN胎牛血清FBS ST30-3302 、PAN ES級(jí)別胎牛血清 ST30-2602 、PAN胎牛血清Plus ST30-3302P 。

NTC優(yōu)等胎牛血清 SFBE。

Gemini優(yōu)等胎牛血清 900-108 、Gemini特級(jí)胎牛血清 100-500  、Gemini科研用人AB血清100-512 。

TCB胎牛血清 101ZC。

Sigma 特級(jí)胎牛血清F2442 、Sigma正常人AB血清 H4522 。

SBI 無(wú)外泌體血清 EXO-FBS-50A-1

胎牛血清盒裝A31608-02、馬血清16050-122。

雙抗15140-122、SV30010  、胰酶 25200-056、SH30042.01 、GIBCO 胰酶 25200-072。

MCF7/Taxol人乳腺癌紫杉醇耐藥株

HCT8/5-fu 人回腸直腸腺癌細(xì)胞五氟尿嘧啶耐藥株

LOVO/5-FU 人結(jié)腸癌細(xì)胞五氟尿嘧啶耐藥株

HCT116/L人結(jié)腸癌奧沙利鉑耐藥細(xì)胞

HL60/ADR人早幼粒急性白血病細(xì)胞耐阿霉素株

PC9GR(PC9R)人肺癌細(xì)胞耐吉非替尼

LOVO/ADR人結(jié)腸癌細(xì)胞阿霉素耐藥株

HNE1/DDP人鼻咽癌細(xì)胞順鉑耐藥株

SGC7901/5-fu人胃癌細(xì)胞五氟尿嘧啶耐藥株

A549/DDP人肺癌細(xì)胞順鉑耐藥株

MCF-7/DDP人乳腺癌細(xì)胞順鉑耐藥株

A549/ADR人肺癌細(xì)胞阿霉素耐藥株

SGC7901/DDP人胃癌細(xì)胞順鉑耐藥株

SKOV3/DDP人卵巢癌細(xì)胞順鉑耐藥株

HELA/DDP人宮頸癌耐順鉑細(xì)胞株

NCI-H1650 人肺支氣管癌細(xì)胞

RT4 人膀胱移行細(xì)胞乳頭瘤 、SK-N-MC 人神經(jīng)上皮瘤細(xì)胞

SK-N-SH 人神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞 、SW982 人滑膜肉瘤細(xì)胞

T98G 人膠質(zhì)母細(xì)胞瘤 、U251MG(KO) 人類星形膠質(zhì)細(xì)胞瘤細(xì)胞

U266 人骨髓瘤細(xì)胞 、VCAP 人前列腺癌細(xì)胞

hTERT-HPNE 人胰腺導(dǎo)管細(xì)胞 、ES-2 人卵巢透明細(xì)胞癌細(xì)胞

NCI-H1650人非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞 、H460 人大細(xì)胞肺癌細(xì)胞

HACAT 人永生化角質(zhì)形成細(xì)胞 、HCT116 人結(jié)腸癌細(xì)胞

HEK293 人胚腎細(xì)胞  、HEPG2 人肝癌細(xì)胞

HGC27 人胃癌細(xì)胞(未分化) 、HT-29 人結(jié)腸癌細(xì)胞

HUVEC 人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞 、KYSE150人食道癌細(xì)胞

L02(HL7702)人正常肝細(xì)胞   、LOVO 人結(jié)腸癌細(xì)胞

MCF-10A人正常乳腺上皮細(xì)胞 、MCF7人乳腺癌細(xì)胞

LX-2 人肝星狀細(xì)胞 、MDA-MB-468人乳腺癌細(xì)胞

二、雙抗

雙抗就是青鏈霉素混合液(100X) ，是專門用于細(xì)胞培養(yǎng)的，可以直接添加到細(xì)胞培養(yǎng)液內(nèi)。

雙抗作用是什么？雙抗起的作用：抗生素，抑制細(xì)菌生長(zhǎng)；避免細(xì)胞污染。

培養(yǎng)液中需要加入雙抗嗎？加不加雙抗不是的，視實(shí)際情況而定。

如果你實(shí)驗(yàn)室條件足夠好，如果你操作足夠規(guī)范，就盡量不要加雙抗了。相反，如果你實(shí)驗(yàn)條件不夠，操作也沒有把握，還是加的好。zui好的方法是做個(gè)實(shí)驗(yàn)對(duì)照，看有沒有必要加雙抗。

如何加入雙抗？在細(xì)胞培養(yǎng)液中推薦的青霉素的工作濃度為100U/ml，鏈霉素的工作濃度為0.1mg/ml。

如果加多了話對(duì)細(xì)胞毒性太大，細(xì)胞生長(zhǎng)艱難。加入雙抗時(shí)，一般先加在培養(yǎng)基里，因?yàn)槿绻侵苯釉趽Q液傳代滴加的話，那個(gè)雙抗的濃度實(shí)在不好控制。

誤區(qū)：長(zhǎng)期使用抗生素，以對(duì)抗污染

細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)不應(yīng)常規(guī)使用抗生素

連續(xù)使用抗生素會(huì)促進(jìn)抗生素耐藥性細(xì)胞株的產(chǎn)生，導(dǎo)致輕度污染持續(xù)存在，一旦將抗生素從培養(yǎng)基中去除，這種輕度污染zui終將發(fā)展成大規(guī)模污染

連續(xù)使用抗生素會(huì)掩蓋支原體感染及其他隱性污染

有些抗生素會(huì)與細(xì)胞發(fā)生交叉反應(yīng)，干擾您研究的細(xì)胞過(guò)程

雙抗的保存：雙抗通常情況下在-20℃保存一年。由于該試劑在4℃下長(zhǎng)期存放是不穩(wěn)定的，應(yīng)分裝后在-20℃下避光保存。青霉素在2-8的℃存放時(shí)間不應(yīng)超過(guò)4天，鏈霉素相對(duì)穩(wěn)定一點(diǎn)，在2-8℃可以存放30天左右。切記，雙抗從凍融后里面的基本成分已開始降解。